ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。該法適于測定細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測到每毫升納克水平的細(xì)胞因子（或受體）的水平。在這種測定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體。
②酶標(biāo)記的抗原或抗體。
③酶作用的底物。
根據(jù)ELISA試劑盒的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。
（一）雙抗體夾心法。
（二）雙位點(diǎn)一步法。
（三）間接法測抗體。
（四）競爭法。
（五）捕獲法測IgM抗體。
（六）應(yīng)用親和素和生物素。
ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn). 在這種方法中, 通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. 通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體, 而且抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色。
操作注意事項(xiàng)
1.ELISA試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
4.所有液體組分使用前充分搖勻。
|
