跳孔(Drift)在做科研實驗時有沒有發現,很多ELISA試劑盒實驗因為跳孔而出現倒置現象。其實跳孔的定義是酶標板從左側到右側的孔或從上到下的孔內信號出現顯著的倒置現象。
一、剛配置試劑的時候中斷了,這是否會影響實驗結果?
◆ 這可能會導致產生波動的曲線。在移液之前確定所有的標準品或者樣品是否配制完好。請在試劑配制完的15-20分鐘內滴加入板內。(除非特別說明)
我是否需要一個多道移液器?
◆ 在配制諸如底物,酶結合物,或者稀釋液的時候,hao選擇連續或多道移液器。
二、如果沒有平衡試劑會怎樣?
◆ 沒有平衡的試劑會導致孔之間溫度不均,使整個酶標板的信號產生變異。除非特別說明,試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。
◆ 每次檢測都會有推薦的孵育時間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長的孵育時間。所以使用說明書上推薦的孵育溫度和時間。
三、是否需要蓋板?
◆ 參看試劑盒內說明書。如果說明書內的實驗步驟中有推薦使用蓋板,則在使用時應選用與酶標板配套的蓋板,使邊緣與酶標板緊密契合。如果蓋板的一邊突起,則會產生信號的差別。
四、酶標儀的設置怎樣影響我的結果?
◆ 對于底物測定,如果讀數時間等于或超過2秒/孔,使從孔到后一孔在讀書時存在時間上的延誤,會導致結果的異變。在底物反應階段,辣根過氧化物酶會一直作用直到底物反應完全。而由于時間的延誤,底物越來越少,底物反應也受到影響。將酶標儀的讀數時間設定為1.0秒/孔。
五、是否可以根據自己的方案來調整孵育時間?
◆ 更改孵育時間或溫度會導致檢測不能達到平衡或過度反應。請按照說明書推薦的孵育時間和溫度操作。
◆ 如果同時進行多項檢測,對每孔必需分別計時已避免孵育不足或過度孵育。
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