如需選取新的ELISA試劑盒，首先需要仔細(xì)評估檢測性能。重要參數(shù)包括靈敏度、動態(tài)范圍以及精度，這些在多數(shù)的ELISA試劑盒都有報告。對于典型樣品類型而言，其它參數(shù)對ELISA性能更具預(yù)測價值。回收率(%)及稀釋線性測量實際樣品中的靶蛋白，這些實際樣品包括血漿、血清或細(xì)胞培養(yǎng)基。本期內(nèi)容旨在告訴您如何解讀不同參數(shù)，以幫助您的樣品找到最合適的 ELISA 試劑盒。選擇ELISA試劑盒時需要注意的參數(shù)匯總：
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參數(shù)
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驗收標(biāo)準(zhǔn)
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靈敏度
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取決于靶蛋白*
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動態(tài)范圍
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批內(nèi)精度 CV (%)
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≤ 10%
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批間精度 CV (%)
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≤ 15%
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特異性
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檢查與高度同源性蛋白的反應(yīng)
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回收率 (%)
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≥ 80%
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稀釋線性
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與未稀釋樣品差異達(dá) 20%
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ELISA靈敏度
靈敏度是ELISA試劑盒抗體對可檢測的最低蛋白水平。
ELISA動態(tài)范圍
動態(tài)范圍是檢測可準(zhǔn)確量化的靶蛋白高濃度到低濃度區(qū)間。了解樣品中預(yù)計的靶蛋白水平非常重要，這可以幫助檢查給定的 ELISA 試劑盒靈敏度及動態(tài)范圍是否合適。如果樣品靶蛋白濃度很高，可以對樣品進(jìn)行稀釋，以確保原始信號在測定的動態(tài)范圍之內(nèi)。當(dāng)檢測實驗中有兩個參數(shù)時，簡單的用標(biāo)準(zhǔn)蛋白來測定濃度往往會不準(zhǔn)確。因為這很可能無法反應(yīng)出樣本中內(nèi)源蛋白的動態(tài)變化。
ELISA CV
CV(%)或變異系數(shù)代表了測定的一致性。CV的計算主要是用于評估批間精度或板間一致性，以及批內(nèi)精度或同一實驗中重復(fù)測定結(jié)果的一致性。––批間CV百分率小于15%通常是可以接受的。––批內(nèi)CV百分率應(yīng)低于10%。
ELISA特異性
確保ELISA試劑盒使用的抗體不與非靶蛋白進(jìn)行交叉反應(yīng)，這點非常重要。這些可能是不同物種間的高同源性蛋白。比如，人體因子 IX SimpleStep ELISA® 試劑盒(ab188393)特異于人體因子 IX 且不與小鼠、大鼠、兔子、山羊、豚鼠、倉鼠、牛、狗或豬樣本發(fā)生反應(yīng)。
ELISA回收率
回收率(%)是通過給一份生物樣品類型（同時也稱樣品基質(zhì)）里加入已知數(shù)量的純化靶蛋白而確定的。對于分泌蛋白，比如細(xì)胞因子，常見的樣品基質(zhì)有血漿及血清；對于細(xì)胞內(nèi)蛋白，比如激酶，樣品是細(xì)胞培養(yǎng)裂解物。測量ELISA中的加標(biāo)樣品，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。將計算的濃度與已知的蛋白濃度進(jìn)行比較，以百分比的形式呈現(xiàn)。比如，100% 回收率表示觀察濃度與樣品里加標(biāo)蛋白的實際濃度一致。這表明同一樣品類型中的其它蛋白及分子并未干擾靶蛋白的量化。如果對于某一特定樣品類型，回收率測量值小于 80%，則需要選取另一套不同的 ELISA 試劑盒以供量化。
ELISA稀釋線性
稀釋線性與回收率彼此相輔相成，因為它主要測量了生物樣品里的天然蛋白，而非加標(biāo)蛋白。稀釋線性是根據(jù)ELISA測量的已知陽性樣品中的不同稀釋度來確定的。靶蛋白濃度通過將稀釋因子乘以計算所得濃度來確定。為獲取最佳結(jié)果，所有稀釋液的樣品濃度都應(yīng)保持一致。如果發(fā)現(xiàn)與未稀釋樣品的差異超過20%，則需要選取其它ELISA試劑盒來做精準(zhǔn)定量。
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