ELISA試劑盒試驗稀釋血清的過程:
先把蛋白稀釋必定的倍數(shù),比如說10倍、20倍稀釋(這樣能夠大體斷定一個參數(shù)),將抗原進行一系列稀釋包被微量反響板,再用必定稀釋度的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷,再加酶結(jié)合物進行反響,經(jīng)孵育洗刷后,加底物溶液顯色,停止反響后別離測定O.D值,挑選O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為*適包被濃度。
一般總是要挑選那個O.D值稍大于1.0,而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有顯著差別。
在ELISA試劑盒試驗血清為什么要稀釋?有兩個原因:
1)競賽按捺比較顯著,應(yīng)稀釋競賽物;
2)以下降非特異性反響,使特異性的抗原抗體反響充分體現(xiàn)出來。
血清稀釋用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,當(dāng)然如果你嫌費事我覺得用生理鹽水代替PBS也不大。不論你是用直接競賽仍是間接競賽,血清的稀釋倍數(shù)肯定要事前斷定,但也不用一點點,你做一個預(yù)試驗即可,挑選OD在1.0左右的稀釋倍數(shù),即你的競賽ELISA中陰性孔OD在1.0,這樣作出來的曲線比較靈敏。
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