STEP1 選擇同一批次的試劑
雖然,每個廠家都會對不同批次的試劑盒進(jìn)行質(zhì)量控制檢測,但嚴(yán)格得說,每個批次的產(chǎn)品間,都或多或少還是會有可接受范圍的差異,有些是10%、有些是15%。所以如果在進(jìn)行大批量或長時間樣品的篩檢的時候,能夠預(yù)先把樣本包含重復(fù)實驗數(shù)量和質(zhì)控樣品數(shù)量都先估算清楚,購買同一個批次的試劑盒會減少不同批次造成的數(shù)據(jù)漂移。
STEP2 預(yù)包被試劑盒
依照ELISA操作步驟來手工操作包被,雖然并不是特別困難的實驗,缺點是受單次手工包被能夠運行板數(shù)的限制,并且不同次包被出來的板難免會有差異。因此,使用廠家機械化大量預(yù)包被好的試劑盒,能夠減少手工包被的誤差,使孔間跟板間的誤差減到最小。

STEP3 精簡工作流程
雖然,使用預(yù)包被ELISA操作步驟會比自行包被省時省力,但仍需要17個步驟才能獲得最后的數(shù)據(jù),而且這17個步驟中,每一步都有可能引入誤差。
所以,精簡操作步驟,就能夠進(jìn)一步減少誤差。
STEP4 正確的處理樣品跟對照品
許多細(xì)胞因子表達(dá)量低,很容易在樣品運送過程中或是保存不當(dāng)?shù)那闆r下降解,導(dǎo)致無法檢測到。因此,適當(dāng)?shù)谋4姝h(huán)境、避免超過一次以上的凍解,都是必須要考量的樣品處理步驟。
另外,除了空白和/或陰性對照之外,相同的陽性對照放在不同板上同時檢測也是非常重要的對照品。
STEP5 可靠設(shè)備提高數(shù)據(jù)一致性清洗是否完全,也會造成ELISA的結(jié)果變異。
如果需要清洗多個ELISA板,自動化洗板機除了減少人力、還能夠減少誤差。
最后,就是讀取數(shù)據(jù)的酶標(biāo)儀了,一個最佳條件的讀板儀必備條件包括:
1、集成的孵育箱和振蕩器,可消除使用孵育 ELISA 其他儀器的需求
2、參考校準(zhǔn)系統(tǒng),可跟蹤和檢測器的自然變化
3、良好的板/孔定位準(zhǔn)確度和精度以及驗證板運動的方法
4、 選擇在板移動和讀取吸光度之間使用液體沉降延遲
5、 可以對來自不同制造商的板使用單獨的板尺寸圖
6、 全自動且連續(xù)的診斷,并報告讀板器狀態(tài)和性能信息
7、 特殊功能確保數(shù)據(jù)質(zhì)量和數(shù)據(jù)安全
8、 驗證每個運動組件的移動(例如板載、光學(xué)頭、濾光片輪)
9、 執(zhí)行外部驗證的選項
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