自行割取小鼠腦組織
4℃預冷的PBS漂去組織血漬，濾紙吸干殘留的PBS；
稱重，加入裂解液勻漿（在冰上）；
將得到的勻漿液用液氮反復凍融3次；
室溫靜置30mins，4℃15000r/min離心1h，取上清，分裝，-80℃保存。
簡介：目的建立動物組織內P53蛋白的免疫檢測分析方法,為P53生物藥物的代謝分布研究提供檢測手段。方法辣根過氧化物酶（HRP）標記抗P53蛋白單克隆抗體3P40,應用標記后的抗體及重組P53蛋白的檢測,建立競爭性ELISA檢測方法;應用此方法建立血清樣品中P53蛋白標準曲線,測定腹腔注射P53后不同時間小鼠血清中P53濃度。結果利用親和層析純化的3P40,進行HRP標記,ELISA檢測3P40HRP滴度可達1∶200 000;建立的競爭性ELISA方法可以檢測PBST中P53蛋白,靈敏度達30 ng/ml,日內精密度較高,相對標準偏差（RSD）小于5%,體現較好的重復性;分別應用正常小鼠血清、PBST稀釋的重組P53蛋白樣品進行競爭性ELISA檢測,結果顯示小鼠血清成分對P53蛋白檢測有一定的影響;應用血清制備P53蛋白的標準曲線,檢測了腹腔注射P53蛋白后不同時間點小鼠血清樣品中的P53蛋白濃度。結論進行了抗P53單克隆抗體3P40的HRP標記,建立了競爭性ELISA方法,可用于P53蛋白藥物血藥濃度檢測。
樣本暫時不測時負80冷凍保存，一般可以放置6個月左右，負20可放3個月，（若被檢物質見光易分解則需避光保存）制備好的勻漿液需當天進行測定（提取液不是被檢物質的zui適環境） 1 準確稱取組織重量按重量（g）：體積（ml）=1：N的比例加N倍體積的生理鹽水（或PBS）（推薦N=9），冰水浴勻漿（機械式，手動等，超聲不太推薦），制備成一定濃度的勻漿液，離心（根據被檢物質的具休要求，推薦3000轉/分左右），取上清待測2 由于勻漿（提�。┻^程中會產生的一定的系統誤差，需對其進行較正可根據測其上清液中蛋白濃度進行較正
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