將抗原或抗體固定在進程稱為包被（coating）。換言之，包被便是抗原或抗體結合到固相載體外表的進程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的作用。接下來就向大家介紹一下在ELISA實驗中優(yōu)化包被的方法。
一、挑選合適的包被抗原
包被抗原可分為天然蛋白，重組蛋白和小分子抗原三類。天然蛋白通過直接吸附凈化包裝要求，許多雜質抗原的間接方法可以捕獲數(shù)據(jù)包（和靶抗原反應物質如直接吸附在酶標板，然后通過抗原抗體的固相的特異性反應）。重組蛋白的純化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有機化合物，分子量太小，很難直接吸附在酶標板，通常和不相關的蛋白質如牛血清白蛋白，耦合，耦合的固相載體上的吸附。
二、挑選合適的包被液
一般是一個ph9.6碳酸鹽緩沖液，如果包被抗原在堿性條件下不穩(wěn)定，也可以用pH7.2磷酸鹽緩沖溶液。
三、選擇合適的包被溫度
通常在4-8度2小時通宵或37度的條件下，我們強烈建議在4-8溫度范圍內，有利于保持蛋白的活性。選擇4層濃度包被固相載體和涂層性能改變物質的最佳濃度，總蛋白涂層濃度1-5ug/ml，應該明確涂層的最佳濃度的特異性抗原的實驗測定。
四、包被后的封閉選擇
封閉是否必要，取決于酶聯(lián)免疫吸附模型和具體實驗條件。一般來說，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作清洗徹底，無閉也可以得到滿意的結果。測定及間接的方法，一般的封閉是必不可少的。常見的密封膠主要有0.5%牛血清白蛋白，10%胎牛血清，明膠1%，脫脂奶粉5%，abmart建議使用5%脫脂奶粉，但脫脂奶粉5%只適合短期使用，不要長期保存。
在ELISA實驗中，包被是非常重要的步驟，學會了優(yōu)化包被的方法，實驗的結果會更
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