將抗原或抗體固定在進(jìn)程稱(chēng)為包被（coating）。換言之，包被便是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的進(jìn)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用。接下來(lái)就向大家介紹一下在ELISA實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化包被的方法。
一、挑選合適的包被抗原
包被抗原可分為天然蛋白，重組蛋白和小分子抗原三類(lèi)。天然蛋白通過(guò)直接吸附凈化包裝要求，許多雜質(zhì)抗原的間接方法可以捕獲數(shù)據(jù)包（和靶抗原反應(yīng)物質(zhì)如直接吸附在酶標(biāo)板，然后通過(guò)抗原抗體的固相的特異性反應(yīng)）。重組蛋白的純化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有機(jī)化合物，分子量太小，很難直接吸附在酶標(biāo)板，通常和不相關(guān)的蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白，耦合，耦合的固相載體上的吸附。
二、挑選合適的包被液
一般是一個(gè)ph9.6碳酸鹽緩沖液，如果包被抗原在堿性條件下不穩(wěn)定，也可以用pH7.2磷酸鹽緩沖溶液。
三、選擇合適的包被溫度
通常在4-8度2小時(shí)通宵或37度的條件下，我們強(qiáng)烈建議在4-8溫度范圍內(nèi)，有利于保持蛋白的活性。選擇4層濃度包被固相載體和涂層性能改變物質(zhì)的最佳濃度，總蛋白涂層濃度1-5ug/ml，應(yīng)該明確涂層的最佳濃度的特異性抗原的實(shí)驗(yàn)測(cè)定。
四、包被后的封閉選擇
封閉是否必要，取決于酶聯(lián)免疫吸附模型和具體實(shí)驗(yàn)條件。一般來(lái)說(shuō)，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作清洗徹底，無(wú)閉也可以得到滿意的結(jié)果。測(cè)定及間接的方法，一般的封閉是必不可少的。常見(jiàn)的密封膠主要有0.5%牛血清白蛋白，10%胎牛血清，明膠1%，脫脂奶粉5%，abmart建議使用5%脫脂奶粉，但脫脂奶粉5%只適合短期使用，不要長(zhǎng)期保存。
在ELISA實(shí)驗(yàn)中，包被是非常重要的步驟，學(xué)會(huì)了優(yōu)化包被的方法，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果會(huì)更
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