所謂“花板”,就是空白、陰陽性對照及室內質控孔結果正常,而標本孔的OD值卻偏高。“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),往往會給實驗者判讀結果帶來麻煩。
為了避免“花板”問題的出現(xiàn),降低檢測的假陽性率,獲得更理想的實驗結果,在檢測過程中應采取下列措施:
1、在選擇ELISA試劑時,應選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時的試劑。
2、在所有標本進行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響。
3、血液標本應置于室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至低。
4、檢測之前,加大離心轉速,盡量延長時間,使血細胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細胞與血清徹底分離。
5、加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實驗結果。
6、對于血清中存在的紅細胞或纖維蛋白原,可以在加樣前離心時得到控制,同樣也可以通過適當增加洗滌次數(shù)和浸泡時間來進一步減輕或避免對實驗結果的影響。同樣,對于血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數(shù)和延長浸泡時間也同樣有效。
7、封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導致“花板”的出現(xiàn)。
8、孵育時間過長,增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會造成“花板”。因此,除把握孵育時間外,在加樣過程中也應嚴格控制時間,標本較多時可分批操作。
9、手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。
10、用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導致“花板”的出現(xiàn)。
11、洗液的溫度也會影響洗板的干凈程度,尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板”問題。
12、洗液要注滿孔,孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。
13、洗液要盡量新鮮配制,放置時間過長易產(chǎn)生絮狀物或渾濁,造成堵孔或花板。
在ELISA實驗中,任何一個小細節(jié),都會對實驗的結果產(chǎn)生影響,“花板”現(xiàn)象也是非常容易出現(xiàn)的問題,所以大家在實驗中一定要仔細謹慎。
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