通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說明書、教科書上也都提到,加樣時要避免出現(xiàn)氣泡,那么氣泡會對實驗有什么影響呢?我們又該如何避免氣泡的產(chǎn)生呢?
通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸。使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。
2、包被時有氣泡的話,將導(dǎo)致包被不完全,實際包被量下降,最后結(jié)果呈現(xiàn)弱陽性甚至假陰性。
3、封閉時有氣泡的話,將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點的存在,引起非特異性結(jié)合,造成本底增高,結(jié)果呈現(xiàn)假陽性。
4、加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合,結(jié)果呈現(xiàn)弱陽性甚至假陰性。
5、加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合,結(jié)果呈現(xiàn)弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
6、加顯色液時有氣泡的話,造成顯色不完全。
7、加終止液時有氣泡的話,會導(dǎo)致不能完全終止反應(yīng),影響酶標(biāo)儀比色,也會導(dǎo)致OD值增高。
8、洗滌時有氣泡的話,非特異性結(jié)合物不能完全洗去,做無用功。
避免方法:
1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。
2、封閉時一定要加滿孔。
3、洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來最終驅(qū)除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。
由此看來,氣泡對ELISA實驗會產(chǎn)生很大的影響,所以各位科研人員要按照要求進(jìn)行實驗,避免氣泡的產(chǎn)生,影響最終的實驗結(jié)果。
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