景噪音會影響結果的判斷。那么該如何降低ELISA實驗中的背景影響呢？下面我們一起來看看。
1、洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。
2、封閉更關鍵
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高是封閉不充分的原因，可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。最常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%）的封閉液，它會降低特異結合，產生假陰性。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
3、檢測試劑要適量
切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度。
以上就是減少ELISA實驗中背景因素影響的方法，大家在實驗過程中一定要多加注意。
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